[Laboratorio] Citometría de Flujo

Definición

• La citometría de flujo es una técnica de estudio y detección rápida de ciertos parámetros de una célula cuando pasan una a una frente al láser. Esto permite un análisis estadístico  más exacto, y ofrece información simultánea de varios parámetros  de cada célula analizada y su relación con otras células. 
• —Permite el análisis de aproximadamente 5000 células por segundo y permite llevar un registro computarizado de éstas.
• Se pueden hacer distintos ensayos como la estimación del contenido de ácidos nucleicos o la detección de antígenos u organelos celulares por medio de anticuerpos marcados con fluorocromos.
• —La citometría de flujos permite la separación de subpoblaciones celulares según sus características.

Método

SISTEMA DE PIPETEO Y ANÁLISIS

• El CMF tiene un tubo en donde se pipetea la muestra a analizar.
• La muestra pasa por una sonda de silicona con un conducto estrecho para alinear las células (60nm).
• Luego pasan por un cono donde se absorbe líquido envolvente a presión para terminar de alinearlas

 SISTEMA ÓPTICO— 

• Células pasan por el rayo laser generando una penumbra directamente proporcional al tamaño de la célula —— 
• Los organelos intracelulares producen difracción de luz proporcional a la complejidad citosomal—— 
• Mediante la relación antígeno-anticuerpo se puede marcar la célula con fluorocromos (específico) 
• Se puede unir mas de una antígeno a la misma célula  

SISTEMA ELÉCTRICO 

• Las diferencias de señales lumínicas son recogidas por los distintos receptor
• FS recoge la penumbra —
• SS recoge la cantidad de luz desviada por la complejidad del citoplasma
• —La fluoreciencias son recibidas por receptores tras ser filtrada por diferentes cristales dicroicos capaces de reflejar longitudes de ondas determinas

Registro Informático

• —Los diferentes receptores transforman la luz en señales eléctricas, que son enviadas a un registro informático.
• —Conociendo el tamaño celular, complejidad citoplasmática y la cantidad de antígenos que tiene la membrana (metabólico, estructura y/o tipo celular) nos permite deducir el tipo celular.
• —Puedo seleccionar la población con los parámetros de interés.
• —Con estos datos se puede hacer, por ejemplo un histograma (un único parámetro como la longitud de onda)

 Bibliografía

• Rafts lipídicos e IL-12R: nuevos avances en el control de la actividad proliferativa del IL12. Ana Canada Sánchez. Pag 123 -124
• —Técnico especialista en laboratorio de atención primaria del instituto catalán de salud. María del Carmen Silva García, María José García Bermejo